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枯草芽孢桿菌的高密度發(fā)酵及噴霧干燥方法

瀏覽次數(shù):17602022/01/14  

1. 一種枯草芽孢桿菌的高密度發(fā)酵及噴霧干燥方法,其特征在于,包括如下步驟: (a) 、菌種活化:將在4°C溫度下斜面保存的枯草芽孢桿菌劃線于NA培養(yǎng)基上,于30?37 °C培養(yǎng)20?30h; (b) 、種子液制備:挑取活化的菌落,接種到滅菌后的肉湯培養(yǎng)基中,于30?37°C、150? 220rpm恒溫振蕩搖床培養(yǎng)20?30h,制成種子液; (c) 、發(fā)酵罐培養(yǎng):將制備好的枯草芽孢桿菌種子液以1?10%的接種比例移入裝有發(fā) 酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中;發(fā)酵過程中采用補(bǔ)料分批發(fā)酵控制方法:在發(fā)酵第6h前流加葡萄糖 液維持5?10g/L殘?zhí)菨舛?;同時(shí)補(bǔ)加酸性pH調(diào)節(jié)劑或堿性pH調(diào)節(jié)劑使發(fā)酵液pH維持在6.5 ?8.0范圍;其它發(fā)酵條件為:通氣量1?3: 1VVM,溫度30?37°C,攪拌轉(zhuǎn)速200?600rpm,罐 壓0.03?0.07MPa,發(fā)酵時(shí)間20?30h;得到高密度發(fā)酵菌液; (d) 、噴霧干燥:在高密度發(fā)酵菌液中加入2?10%w/v的保護(hù)劑,攪拌均勻后進(jìn)行干燥; 噴霧干燥條件為:進(jìn)風(fēng)口溫度150?180°C,出風(fēng)口溫度70?90°C,進(jìn)料速度1?3L/h;收集得 到枯草芽孢桿菌干粉制劑。

2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種枯草芽孢桿菌的高密度發(fā)酵及噴霧干燥方法,其特征在 于,步驟(c)中,自初始狀態(tài)到發(fā)酵罐內(nèi)活菌數(shù)達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)的發(fā)酵階段,發(fā)酵罐內(nèi)的溫度 控制在34?37°C;發(fā)酵罐內(nèi)的活菌數(shù)達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)至放罐階段,發(fā)酵罐內(nèi)的溫度控制在30 °C?34°C。

3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種枯草芽孢桿菌的高密度發(fā)酵及噴霧干燥方法,其特征在 于,步驟(d)中,所述保護(hù)劑選自玉米淀粉、蔗糖、糊精、乳糖、碳酸鈣、磷酸氫鈣、硫酸鈣、微 晶纖維素、聚天冬氨酸、脫脂乳粉、海藻糖中的至少一種。

4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種枯草芽孢桿菌的高密度發(fā)酵及噴霧干燥方法,其特征在 于,步驟(d)中,發(fā)酵菌液中加入的所述保護(hù)劑為1.8%碳酸鈣、3.2%微晶纖維素、2%聚天 冬氨酸。

5. 根據(jù)權(quán)利要求1到4任一項(xiàng)所述的一種枯草芽孢桿菌的高密度發(fā)酵及噴霧干燥方法, 其特征在于,步驟(c)中所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為:玉米淀粉5?15g/L,蛋白胨1?5g/L,酵 母粉1?58/1,似0:15?1(^/1,消泡劑1?58/1,余量為水;所述發(fā)酵培養(yǎng)基的消后?11為6.5 ?7 ? 5。

6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種枯草芽孢桿菌的高密度發(fā)酵及噴霧干燥方法,其特征在 于,所述消泡劑為聚醚類、有機(jī)硅類、聚醚改性硅類中的至少一種。

7. 根據(jù)權(quán)利要求1到4任一項(xiàng)所述的一種枯草芽孢桿菌的高密度發(fā)酵及噴霧干燥方法, 其特征在于,步驟⑹中,所述酸性pH調(diào)節(jié)劑選自于濃度為5?10wt %的稀鹽酸或稀硫酸或 稀磷酸,堿性pH調(diào)節(jié)劑選自于濃度為5?l〇wt %的氨水或10?20wt %氫氧化鈉。

8. 根據(jù)權(quán)利要求1到4任一項(xiàng)所述的一種枯草芽孢桿菌的高密度發(fā)酵及噴霧干燥方法, 其特征在于,步驟(c)中,得到的發(fā)酵菌液的枯草芽孢桿菌活菌數(shù)濃度多150億cfu/mL,芽孢 轉(zhuǎn)化率多97 %。

9. 根據(jù)權(quán)利要求1到4任一項(xiàng)所述的一種枯草芽孢桿菌的高密度發(fā)酵及噴霧干燥方法, 其特征在于,噴霧千燥制得的枯草芽孢桿菌干粉制劑的枯草芽孢桿菌活菌數(shù)濃度多1000億 cfu/g,菌種存活率高于85%。


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